实时荧光定量RT-PCR(TaqMan探针法)

 

 

 

实时荧光定量RT-PCR法检测原理(TaqMan探针法)

 

TaqMan探针法包括一对引物和一个只与模板特异性结合的荧光探针,该探针的5’端标记有报告荧光基团,3’端标记有淬灭荧光基团。当探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收,仪器检测不到信号。当PCR扩增时,Taq酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针,其3’-5’外切酶活性将探针酶切降解,报告荧光基团与淬灭荧光基团分离,荧光监测系统可接收到荧光信号。因此,每经过一个PCR循环,就有一个荧光分子形成,荧光信号的累积与PCR产物的形成有一个同步指数增长的过程,再通过实时监测整个PCR进程荧光信号的积累,与标准曲线对比进行定量分析。

 

 

 
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